苦豆子SopAora a/opecuroirfes L•为豆科槐属多年 生草本植物，主要分布于我国西北荒漠地区,生态适 应性强，资源丰富，其药用部位为可再生的地上部 分，味苦性寒，具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等 作用，在民间广泛用于痢疾、肠炎等疾病，1977年版 《中国药典》首次收载。苦豆子总碱是苦豆子的干 燥全草或种子提取而得的总生物碱，槐定碱为其主 要的生物碱之一。文献表明，苦豆子总碱具有抗炎、 抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用，其抗炎机制是通 过对炎症过程的直接干预而发挥作用[~。本课题 组前期研究表明，苦豆子总生物碱能显著改善三硝 基苯磺酸（TNBS)致溃瘍性结肠炎的大鼠一般体征， 抑制患鼠体重下降，减轻结肠病理学改变;初步作用 机制可能通过抗氧化以及调节炎症因子CD4+， CD25 +，CD8+，CD28-Tregs 比例及 IL-10，ICAM-1， MIF,TFF3等蛋白表达而实现;并取得国家专利“苦 豆子总生物碱在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应 用及结肠靶向制剂的制备方法”>7],为更好的发挥 苦豆子总碱治疗溃疡性结肠炎的作用，使药物以较 高浓度分散于整段结肠，发挥其直接、局部的抗炎作 用，避免对胄的刺激，减少对非病变区的毒副作用， 有必要研发苦豆子总碱结肠定位释放制剂。本实验 采用靶向性强的细菌触发型结肠释药系统、以瓜尔 胶为骨架材料制备了苦豆子总碱结肠定位释放瓜尔 胶水凝胶骨架片。

1仪器和试药

德国58对〇1'1〇118〇?2250型1/万天平；80,20,16 目不锈钢筛；RC>6溶出度测定仪（天津市国铭医药 设备有限公司）；ZDY*8重型单冲压片机（上海远东 制药机械总厂）；YD-20片剂硬度测定仪，FT-2500型 脆碎度测定仪（天津市天大天发科技有限公司）。

苦豆子总碱（槐定碱质量分数42. 7%，由宁夏 盐池制药有限公司提供，批号070212);瓜尔胶印度 H. B. Gum. Ind. Pvt.公司，国内分装；糊精，可溶 性淀粉均为药用级。清洁级SD雄性大鼠280 ~ 320 g(南方医科大学动物实验中心提供，合格证号 SCXK-(粤）2002*009，2006A047) 0 2方法

2.1槐定碱含量测定依据苦豆子总碱WS-10001 (HD-1391)-2003标准检测槐定碱质量分数并进行 适当条件优化，色谱柱Kromasil 100-5NH2 column (4.6 mmx250 mm，5 nm);流动相乙腈-磷酸水溶

液（pH2)-无水乙醇（80: 8:10);检测波长205 nm;流 速1. 0 mL.mirT1，柱温30 t，外标法定量。

专属性试验:HPLC色谱峰（见图1)表明槐定碱 出峰时间无干扰峰。

i 1 i • + +»>*

线性关系考察：分别精密吸取5,2.5,1.25, 0.625,0.025 mL对照品储备液，至10 mL量瓶中， 甲醇稀释至刻度，摇勻，分别吸取对照品储备液、对 照品不同浓度稀释液20 ftL,按上述色谱条件测定， 标准曲线方程为:K = 3 460.5* + 15. 521，r = 1.000 (0. 02 ~ 8. 3 p,g) 〇

精密度试验：精密吸取对照品溶液（0.052 mg- ml/1) 20 #，连续进样6次，平均峰面积为 3581. 74,RSD 0.3%，表明仪器精密度良好；

重复性试验:按“对照品溶液的配制”项下方法 制备供试品溶液5份，平均质量分数为42.93%， RSD 2. 61%，表明分析方法重现性良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液20 pX， 分别于〇,4,8，12,24,48,72 11重复进样7次，每次 20 ftL,测定峰面积，槐定碱的RSD 0.35%,说明供 试品溶液在72 h内稳定。

回收率试验:精密量取已知含量的苦豆子总碱 3 mg,分别加人一定量对照品贮备液，依法处理、测 定，平均回收率为98.67%，RSD 3.2%。 2.2定位释放片在模拟胄液、小肠液、结肠液体外 释放度评价采用2005年版药典附录XC溶出度 测定法中第三法，即小杯小桨法。搅拌桨转速50 r- min — 1;温度（37±0.5)*1：。将样品投入杯中，分别放 人人工胃液200 mL中，2 h后取样1 mL(同时补加 等量等温的溶出介质）。在30 s内过0.45 pm微滤 膜，进样测定。将人工胃液小心倒出，加入人工肠液 200 mL分别于4,6 h取样1 mL，同时补加等量的溶 出介质，过0.45 tun微滤膜，进样测定。倾去溶出 液，加人200 mL人工结肠液，并通入C02气体，分别 于8,12,16,18,24,26 h取样1 mL(同时补加等量的 溶出介质），直至片完全溶解。过0.2 jun微滤膜， 按上述方法进样测定。

2.3溶液配制人工胃液：取盐酸16.4 mL，加水 至1 000 mL,摇匀，即得。

人工肠液:分别称取NaOH 1. 888 g溶于236 mL 水中，KH2P04 13.10 g溶于500 mL的水中，摇匀定 容至2 000 mL即得。

人工结肠液：清洁级SD大鼠常规伺养，给予 1.5%瓜尔胶水溶液饮用一周，临用前新鲜配制，每 天更换。第8天脱臼处死，在吹C02的操作箱中快 速取盲肠内容物，放进通入C02气体的人工肠液中， 增重法确定盲肠内容物质量，搅拌，定容至大鼠盲肠 内容物4%即得[9]。

3结果

采用湿法制粒压片技术。按配方量400倍称取 一定量的瓜尔胶和糊精，苦豆子总碱瓜尔胶水凝胶骨架片体外释放行为的研究，过80目筛两次混匀；称取 一定量的苦豆子总碱溶于20%可溶性淀粉溶液中， 制软材,快速过22目筛，80弋烘干3 ~4 h,20目整 粒，加人0.5%的硬脂酸镁，11 mm的浅凹冲压片，即 得。

3.1不同处方对片物理特性的影响按表1配方 分别制备A,B，C，D，E片，片物理特性见表2。

表1苦a子总碱水凝胶骨架片E方组成g

配方瓜尔胶糊精

A100150

B125125

C150100

D17575

E20050

注:苦豆子总碱均为1〇〇 g。

表2不同配方骨架片的物理特性

配方休止角

r20目顆粒平均粒度/%

20~40 目 40~60 目硬度癘碎度

/%片重标示董

A266.234.340.44.80.610.348 98.68

B286.732.23U4.70.S20.354 101.33

C288.635.238.26.60.580.352 99.68

D2614.333.336.34.80.760.351 98,35

E3216.232.234.54.50.SS0.349 98.21

包衣C4.90.98

结果表明，所有颗粒色泽均勻一致，有较好的流 动性。配方A颗粒较脆，D，E软材较黏、颗粒呈长 条状;B,C软材适中，粒度分布较好，其中C片硬度 最好，脆碎度为〇• 58%，可压性好。

3.2苦豆子总碱定位释放片在模拟胃液、小肠液、 结肠液中的释放结果表明，苦豆子总碱瓜尔胶水凝胶骨架片体外释放行为的研究，瓜尔胶骨架片在6 h 内（胃液及小肠液）SRI释放为13.5% ~25. 6%，在 结肠液中释放明显加快，6 ~ 12h达55. 4% ~ 75. 1% ,至24 h或26 h完全释放。其中配方A释放 最快，配方D,E释放延迟，显示了一定的结肠定位 释放作用。为进一步延缓其6 h内释放，作者在配 方C的基础上直压瓜尔胶阻止层100 mg制备双层 片，体外释放表明双层片在胃液中不释放，在小肠液 中释放仅为6.78%，在结肠液中最初6 h释放明显 加快,6 ~ 12 h 达 55. 4% ~75. 1%，至 24 h 或 26 h 完 全释放,显示了较好的定位释放特性。结果见图2。

3.3体外释放的数学模型拟合为进一步分析瓜 尔胶水凝胶骨架片的释药行为，槐定碱体外释放曲 线分别采用Higuichi方程、一级方程和零级方程模 型拟合。为研究药物从骨架中释放机制，作者采用 Korsmeyer-Peppas equation[ 1<W31 进行数学模型拟合。 

表3表明，配方A，B，C,D，E采用上述方程拟合接近0.89,对于圆柱形制剂，为骨架溶蚀机制，（配方A，

Higuichi释药模型，一级方程模型拟合最差。用 B，C，D, E的/i分别为1.252, 1.0%, 1.338 7, Korsmeyer-Peppas equation分析其释药机制n >1. 339 2,1. 997 9)，为骨架溶蚀释药。

表3不同配方的苦豆子总碱片体外释放动力学数学模型拟合

配方ABC0Ecoated C

零级方程模型y=6.6715 1-8.165 1y = 4.358 4X + 2.743 5K=4.553 2X-2.463 8y = 4.141 31-2,375y=4.085 51-2.217 7y = 5.022 5X-11.651

相关系数fi2 =0.983 2R2=0,955 40.985 5Jf2 =0.953 6«2 =0.957 1*2 =0.931 6

总方差18 315.19029 186.35027 468.20633 716.08032927.23025 113.600

总均方误差103.2361.195 1124.143500.977449.209644.500

—级方程模型y= -0.219 81 + 5.378 7-0.1461+ 5.125 8-0.211 7JT + 5.6782 -0.134 8X + 5.1798 K= -0.13091+i 1645-0.155JT + 5.309 8

相关系数#2=0.889 4fi2 = 0.940 3K2 =0.794J?2 =0.923 3R2= 0.917R2 =0.915

总方差146.368186.925104.781216.4606216.328112.7

总均方误差17.82823.8115.43031.08229.5330.900

Higuch丨方程模型r=36.2671-52.45r=28.1841-37.349r=：29.1541-43.431y=28.075^-43,819K=27.666X-42.99831.6111-54.263

相关系数I?2 = 0.960 8及2 =0,980 8J?2 =0.991 8*2 =0.972 8*2 =0.974 2«2 = 0.955

总方差18 175.30429 390.44127 522.16833 922,93133 107.26926 701.600

总均方误差241.530155.89870.274293.834270.568471.400

Korame Yer-Peppas 方程模型r= 1.2521+ 1.144 3y=1.096 7X+L28151.338 71+0.599 8r=1.336 5X+0.4419y = 1,339 21+0.423 5y = L997 91-1.278

相关系数R2 = 0.980 7R2=o.msJ?2 =0.973K2 = 0.959 2«2 =0.953/f2 =0.936 5

总方差77.276112.519106.34090.276119.72493.500

总均方误差0.0880.1430.2462.6340.5321.300

4讨论在回盲部和结肠，在人工胃液和人工小肠液释药极 

本制剂基于菌触发原理设计结肠靶向，依据胃 肠菌群梯度变化以及生理排空时间评价其释放，苦豆子总碱瓜尔胶水凝胶骨架片体外释放行为的研究，研 究了苦豆子总碱瓜尔胶骨架片在模拟人体消化道液 中的体外释放，表明该制剂能够达到结肠定位释放 的目的。

近年来对胃肠道各段肠道pH研究发现，肠道 pH从小肠到大肠并无明显梯度变化。胃肠道pH 从胃到回肠由1.2逐步升到7.0,到达盲肠时pH只 降低至6左右，随后又升到7.0。这一发现即可解释 某些pH依赖性结肠给药制剂在体内释药部位变异 性较大的原因。结肠内生存着超过400多种菌群， 菌群密度为K^-lO^CFU^niL」肠液。由于肠道 菌群存在明显的梯度变化，其独特的偶氮还原酶、糖 苷酶及糖苷酸酶等多种酶可作为理想的靶向释药触 发机制。瓜尔胶是半乳甘露聚糖（1:2),主链絝1,4 苷键结合吡喃甘露糖，相对分子质量2.2<105- 3. 0 x 105。瓜尔胶遇消化液形成凝胶，凝胶态不受介 质pH的影响，但能被大肠内菌群代谢[14]。瓜尔胶 的压制包衣片包衣层水化形成黏性凝胶层，使释放 介质渗人片芯的速度大大降低，且由于糖苷酶只存 • 4 • 低。因此利用酶解原理制备的苦豆子总碱压制包衣 片较pH依赖型更有优势，靶向性强。

瓜尔胶水凝胶骨架片和水性介质接触时，聚合 物发生玻璃态向高弹态相转变，同时伴有溶胀过程, 即亲水性分子链吸收水分，由最初的缠绕状态转变 为首尾距离和回转半径不断增大的溶剂化状态。溶 胀时3个可移动区域前沿从内到外依次为:溶胀前 沿（聚合物玻璃态-高弹态相转变前沿）、扩散前沿 (固态药物-溶液态药物转变前沿）和溶蚀前沿（骨架 溶胀-溶蚀转变前沿）[15]。凝胶层是一个亲水性屏 障，限制水分向内渗人及药物向外扩散，其强度决定 了骨架的缓控释能力，与瓜尔胶的量密切相关。在 胃和小肠部位主链在水分子作用下相互交联，形成 致密的凝胶层而延缓释放。瓜尔胶片进人结肠后， 在大肠细菌糖苷酶的作用下，1,4苷键断裂而释放 药物。同时瓜尔胶为一天然功能性辅料，Naito报道 Partially hydrolyzed瓜尔胶能治疗DSS诱导的小鼠肠 炎的作用因此本课题选择瓜尔胶作为定位释 放的载体材料。

瓜尔胶一旦与水性介质接触，表层药物首先释 放，苦豆子总碱瓜尔胶水凝胶骨架片体外释放行为的研究，如果骨架材料不能迅速形成凝胶层，就会发生药 物的“突释。本课题采用直压瓜尔胶阻止层 以达到延缓其释药,达到减少凝胶溶蚀的目的。

本课题采用2005年版《中国药典》二部附录 XIX D缓释、控释和迟释制剂指导原则要求n9]进行 了释药模型的拟合，并对其释药机制作了分析，结果 表明，配方A，B，C,D，E采用上述方程拟合接近 Higuichi释药模型。其释药机制为骨架溶蚀释药，说 明药物从固体骨架中的释药遵循单位面积的释放量 与时间的平方根成正比的规律，为预测体内释药提 供了初步的理论依据。